oncotomskСибирский онкологический журналSiberian journal of oncology1814-48612312-3168Tomsk National Research Medical Сепtеr of the Russian Academy of Sciences10.21294/1814-4861-2020-19-2-49-61oncotomsk-1398Research ArticleЛАБОРАТОРНЫЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯLABORATORY AND EXPERIMENTAL STUDIESПоиск протеомных маркеров рака молочной железы в составе суммарных экзосом кровиSearch for breast cancer proteomic markers in total blood exosomesТутановО. С.TutanovO. S.

Тутанов Олег Сергеевич - старший лаборант, Researcher ID (WOS): R-3938-2016. Author ID (Scopus): 56971591700.

630090, Новосибирск, пр. Лаврентьева, 8

Oleg S. Tutanov - Senior Assistant, Researcher ID (WOS): R-3938-2016. Author ID (Scopus): 56971591700.

8, Lavrentiev Ave., Novosibirsk, 630090

s.tamk@niboch.nsc.ruБакакинаЮ. С.BakakinaY. S.

Бакакина Юлия Сергеевна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, УЗ НАЛ, SPIN-код: 9927-9534, Author ID (Scopus) 37064346900.

223040, Минский район, аг Лесной, 31; 220072, Минск, ул. Академическая, 273

Yulia S. Bakakina - PhD, Senior Researcher, NADL. Author ID (Scopus): 37064346900.

Minsk reg., Belarus2 31, Lesnoy str., Minsk reg., 223040; 27, Academicheskaya str., Minsk, 220072

ПроскураК. В.ProskuraK. V.

Проскура Ксения Викторовна - аспирант, ИХБФМ СО РАН. Author ID (Scopus): 57205562492.

630090, Новосибирск, пр. Лаврентьева, 8; 630108, Новосибирск, ул. Плахотного, 24

Ksenia V. Proskura - PhD-student, ICB FM, SBRAS, Author ID (Scopus): 57205562492.

8, Lavrentiev Ave., Novosibirsk, 630090; 2,Plakhotnogo str., Novosibirsk, 630108

ГригорьеваА. E.GrigoryevaA. Б.

Григорьева Алина Евгеньевна - кандидат биологических наук, младший научный сотрудник, ИХБФМ СО РАН. SPIN-код: 11916659. Researcher ID (WOS): I-3881-2014. Author ID (Scopus): 57189510749. ORCID: 0000-0001-9853-223X.

630090, Новосибирск, пр. Лаврентьева, 8

Alina E. Grigoryeva - Junior Researcher, ICB FM, SBRAS, Researcher ID (WOS): I-3881-2014. Author ID (Scopus): 57189510749. ORCID: 0000-0001-9853-223X.

8, Lavrentiev Ave., Novosibirsk, 630090

СяховичВ. Э.SyakhovichV. E.

Сяхович Виталий Эдуардович - начальник отдела исследований и разработок в допинг-контроле, SPIN-код: 7646-8360. Author ID (Scopus): 6504187425.

223040, Минский район, аг Лесной, 312

Vitaly E. Syakhovich - Head of Doping Control Research and Development Department, Author ID (Scopus): 6504187425.

Minsk reg., Belarus2 31, Lesnoy str., Minsk reg., 223040

БеляевС. А.BeliaevS. A.

Беляев Сергей Александрович – директор.

223040, Минский район, аг Лесной, 312

Sergey A. Beliaev – Director.

Minsk reg., Belarus2 31, Lesnoy str., Minsk reg., 223040

РябчиковаЕ. И.RyabchikovaE. I.

Рябчикова Елена Ивановна - доктор биологических наук, заведующая группой, ИХБФМ СО РАН. SPIN-код: 623-4112. Researcher ID (WOS): G-3089-2013, Author ID (Scopus): 6701791174. ORCID: 0000-0003-4714-1524.

630090, Новосибирск, пр. Лаврентьева, 8; 630090, Новосибирск, ул. Пирогова, 26

Elena I Ryabchikova - Head of Group, ICB FM, SBRAS. Researcher ID (WOS): G-3089-2013. Author ID (Scopus): 6701791174. ORCID: 0000-0003-47141524.

8, Lavrentiev Ave., Novosibirsk, 630090; 2, Pirogova str., Novosibirsk, 630090

ЦенталовичЮ. П.TsentalovichY. P.

Центалович Юрий Павлович - доктор химических наук, заведующий лабораторией, Author ID (Scopus): 57193617761.

630090, Новосибирск, ул. институтская, 35

Yuri P. Tsentalovich - Head of Laboratory, Author ID (Scopus): 57193617761.

3, Institutskaya str., Novosibirsk, 630090

ЛактионовП. П.LaktionovP. P.

Лактионов Павел Петрович - кандидат биологических наук, заведующий лабораторией, ИХБФМ СО РАН, Researcher ID (WOS): G-9804-2013. Author ID (Scopus): 7003559490. ORCID: 0000-0003-4714-1524.

630090, Новосибирск, пр. лаврентьева, 8

Pavel P. Laktionov - Head of Laboratory, ICB FM, SBRAS, Researcher ID (WOS): G-9804-2013. Author ID (Scopus): 7003559490. ORCID: 00000003-4714-1524.

8, Lavrentiev Ave., Novosibirsk, 630090

ТамковичС. Н.TamkovichS. N.

Тамкович Светлана Николаевна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, ИХБФМ СО РАН. SPIN-код: 6462-3700. Researcher ID (WOS): G-9790-2013. Author ID (Scopus) 7801643574. ORCID: 0000-0001-7774-943X.

630090, Новосибирск, пр. Лаврентьева, 8; 630090, Новосибирск, ул. Пирогова, 26

Svetlana N. Tamkovich - Senior Researcher, ICBFM, SBRAS. E-mail: s.tamk@niboch.nsc.ru. SPIN-код: 6462-3700. Researcher ID (WOS): G-9790-2013. Author ID (Scopus): 7801643574. ORCID: 0000-0001-7774-943X.

8, Lavrentiev Ave., Novosibirsk, 630090; 2, Pirogova str., Novosibirsk, 630090

s.tamk@niboch.nsc.ruФГБУН Институт химической биологии и фундаментальной медицины, Сибирское отделение Российской академии наукРоссияInstitute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Siberian Branch of Russian Academy of SciencesRussian FederationУЗ Национальная антидопинговая лаборатория; Институт биофизики и клеточной инженерии, Национальная академия наук БеларусиБеларусьNational Anti-Doping Laboratory; Institute of Biophysics and Cell Engineering, National academy of sciences of BelarusBelarusФГБУН институт химической биологии и фундаментальной медицины, Сибирское отделение Российской академии наук; ГБУЗ Новосибирской области Новосибирский областной клинический онкологический диспансерРоссияInstitute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Siberian Branch of Russian Academy of Sciences; Novosibirsk Regional Oncological dispensaryRussian FederationФГБУН институт химической биологии и фундаментальной медицины, Сибирское отделение Российской академии наукРоссияInstitute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Siberian Branch of Russian Academy of SciencesRussian FederationУЗ Национальная антидопинговая лабораторияБеларусьNational anti-doping laboratoryBelarusФГБУН институт химической биологии и фундаментальной медицины, СО РАН; ФГАОУ ВО Новосибирский национальный исследовательский государственный университетРоссияInstitute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Siberian Branch of Russian Academy of Sciences; Novosibirsk state universityRussian FederationФГБУН Институт Международный томографический центр Сибирское отделение Российской академии наукРоссияInstitute International Tomografic CenterRussian FederationФГБУН институт химической биологии и фундаментальной медицины, Сибирское отделение Российской академии наук; ФГАОУ ВО Новосибирский национальный исследовательский государственный университетРоссияInstitute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Siberian Branch of Russian Academy of Sciences; Novosibirsk state universityRussian Federation2020280420201924961Copyright © Тутанов О.С., Бакакина Ю.С., Проскура К.В., Григорьева А.E., Сяхович В.Э., Беляев С.А., Рябчикова Е.И., Центалович Ю.П., Лактионов П.П., Тамкович С.Н., 20202020Тутанов О.С., Бакакина Ю.С., Проскура К.В., Григорьева А.E., Сяхович В.Э., Беляев С.А., Рябчикова Е.И., Центалович Ю.П., Лактионов П.П., Тамкович С.Н.Tutanov O.S., Bakakina Y.S., Proskura K.V., Grigoryeva A.Б., Syakhovich V.E., Beliaev S.A., Ryabchikova E.I., Tsentalovich Y.P., Laktionov P.P., Tamkovich S.N.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.siboncoj.ru/jour/article/view/1398Актуальность

Актуальность. Актуальной задачей повышения эффективности ранней диагностики онкологических заболеваний является поиск высокоспецифичных опухолевых маркеров в биологических жидкостях организма. Значительная часть экзосом ассоциирована с поверхностью форменных элементов крови, однако белковый спектр таких экзосом ранее не исследовался. использование суммарных экзосом крови (экзосом плазмы и экзосом, ассоциированных с поверхностью клеток крови) может не только значительно повысить специфичность и чувствительность существующих методов, но и выявить новые онкомаркеры для жидкостной биопсии.

Цель работы - поиск кандидатных белковых онкомаркеров рака молочной железы (РМЖ) путем сравнения 2D-протеомных карт суммарных экзосом крови здоровых женщин и больных РМЖ.

Материал и методы

Материал и методы. Экзосомы выделены из крови здоровых женщин и больных РМЖ методом ультрафильтрации с последующим ультрацентрифугированием и охарактеризованы при помощи трансмиссионной электронной микроскопии и иммуноцитохимии. Концентрацию белка в экзосомах определяли при помощи коммерческого набора NanoOrange Protein Quantitation kit (Invitrogen). Протеом экзосом исследован с помощью 2D-электрофореза с последующей идентификацией белков методом масс-спектрометрии.

Результаты

Результаты. Получены высокоочищенные препараты микровезикул суммарной крови размером не более 100 нм, на поверхности которых иммуноцитохимически были выявлены специфические для экзосом маркеры (CD63, CD9 и CD24). Сравнительный анализ протеомных карт экзосомальных белков здоровых женщин и больных РМЖ, полученных с помощью 2D-электрофореза, позволил установить значимые различия в уровне экспрессии и наборе белков в норме и патологии. Методом пептидного фингерпринта идентифицировано 11 перспективных протеомных маркеров РМЖ, из них LRG и у-цепь FGB выявлены в составе экзосом впервые (согласно базе Exocarta). Методом MALDI-TOF масс-спектрометрии идентифицировано 99 белков в препаратах экзосом крови здоровых женщин и больных РМЖ, из них 35 % выявлены в составе экзосом впервые (согласно базе Exocarta). В составе суммарных экзосом крови онкологических больных выявлено 17 (53 %) белков, ассоциированных с РМЖ.

Заключение

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о том, что суммарные экзосомы крови являются перспективным источником диагностического материала для поиска протеомных маркеров РМЖ. идентифицированные протеомные онкомаркеры в их составе требуют дальнейшей валидации.

To improve early detection of cancer, search for tumor markers in biological fluids is of great importance. A significant portion of exosomes is associated with the surface of blood cells, however, the protein spectrum of such exosomes has not been previously studied. The use of total blood exosomes (plasma exosomes and exosomes associated with the surface of blood cells) can not only significantly increase the specificity and sensitivity of existing methods, but also suggest new tumor markers for liquid biopsy.

Objective

Objective. Search for candidate protein tumor markers of breast cancer by comparing 2D-proteomic maps of total blood exosomes of healthy females (HFs) and breast cancer patients (BCPs).

Methods

Methods. Exosomes were isolated from plasma and total blood of HFs and BCPs by ultrafiltration followed by ultracentrifugation and were characterized using transmission electron microscopy (TEM) and immunocytochemistry. Protein concentration in exosomes was determined using the NanoOrange Protein Quantitation kit (Invitrogen) commercial kit. Proteomes of exosomes were studied using 2d electrophoresis followed by protein identification by mass spectrometry.

Results

Results. Highly purified samples of vesicles from plasma and total blood of no more than 100 nm in size were obtained, on the surface of which markers specific for exosomes were detected by monoclonal antibodies CD9. A comparative analysis of the proteomic maps of exosomal proteins of the HFs and BCPs obtained by 2D-electrophoresis allowed us to establish significant differences in the expression level and protein set in normal and pathological conditions. The 11 proteomic markers of breast cancer were identified by the peptide fingerprint method, of which LRG и у-chain FGB were detected in the composition of exosomes for the first time (according to the Exocarta database). Using MALDI-TOF mass spectrometry, 99 proteins were identified in the exosome preparations of the blood of HFs and BCPs, of which 35% were detected in the composition of the exosomes for the first time (according to the Exocarta database). 17 (53%) proteins associated with breast cancer were detected in total blood exosomes of cancer patients.

Conclusion

Conclusion. The results obtained indicate that total blood exosomes are a promising source of diagnostic material for the search for proteomic markers of breast cancer. The identified proteomic tumor markers require further validation.

экзосомытрансмиссионная электронная микроскопиямасс-спектрометрияпротеомные маркерырак молочной железыexosomestransmission electron microscopymass-spectrometryproteomic markersbreast cancerИсследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и Правительства Новосибирской области в рамках научного проекта № 18-415-540012р_аThis work was supported by the Russian Foundation for Basic Research and Government of Novosibirsk region of the Russian Federation, grant 18-415-540012ReferencesWittenM., Parker C.C. Screening mammography: recommendations and controversies. Surg Clin North Am. 2018 Aug; 98(4): 667-75. doi: 10.1016/j.suc.2018.03.003.WittenM., Parker C.C. Screening mammography: recommendations and controversies. Surg Clin North Am. 2018 Aug; 98(4): 667-75. doi: 10.1016/j.suc.2018.03.003.Tamkovich S.N., Tutanov O.S., LaktionovP.P. Exosomes: generation, structure, transport, biological activity, and diagnostic application. Biochemistry (Moscow), Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. 2016 Oct; 10(3): 163-73. doi: 10.1134/S1990747816020112.Tamkovich S.N., Tutanov O.S., LaktionovP.P. Exosomes: generation, structure, transport, biological activity, and diagnostic application. Biochemistry (Moscow), Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. 2016 Oct; 10(3): 163-73. doi: 10.1134/S1990747816020112.Yanez-MoM., Siljander P.R., Andreu Z., Zavec A.B., BorraF.E., Bu-zasE.I., BuzasK., CasalE., CappelloF., Carvalh o J., ColaE., SilvaA.C. Fais S., Falcon-Perez J.M., Ghobrial IM., Giebel B., Gimona M., Gra-ner M., Gursel I., Gursel M., Heegaard N.H.H., Hendrix A., Kierulf P., KokubunK., KosanovicM., Kralj-Iglic V, Kramer-AlbersE.-M, Laitinen S., Lasser S., Lener T., Ligeti E., Line A., Lipps G., Llorente A., Lotvall J., Mancek-Keber M., Marcilla A., Mittelbrunn M., Nazarenko I., Hoen E.N.M., Nyman T.A., O’Driscoll L., Olivan M., Oliveira C., Pall-inger E., del Portillo HA., Reventos J., Rigau M., Rohde E., Sammar M., Sanchez-Madrid F., Santarem N., Schallmoser K., Ostenfeld M.S., Stoorvo-gel W., StukeljR., Van der Grein S.G., VasconcelosM.H., WaubenM.H.M., De Wever O. Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. J Extracell Vesicles. 2015 May; 4: 27066. doi: 10.3402/jev.v4.27066.Yanez-MoM., Siljander P.R., Andreu Z., Zavec A.B., BorraF.E., Bu-zasE.I., BuzasK., CasalE., CappelloF., Carvalh o J., ColaE., SilvaA.C. Fais S., Falcon-Perez J.M., Ghobrial IM., Giebel B., Gimona M., Gra-ner M., Gursel I., Gursel M., Heegaard N.H.H., Hendrix A., Kierulf P., KokubunK., KosanovicM., Kralj-Iglic V, Kramer-AlbersE.-M, Laitinen S., Lasser S., Lener T., Ligeti E., Line A., Lipps G., Llorente A., Lotvall J., Mancek-Keber M., Marcilla A., Mittelbrunn M., Nazarenko I., Hoen E.N.M., Nyman T.A., O’Driscoll L., Olivan M., Oliveira C., Pall-inger E., del Portillo HA., Reventos J., Rigau M., Rohde E., Sammar M., Sanchez-Madrid F., Santarem N., Schallmoser K., Ostenfeld M.S., Stoorvo-gel W., StukeljR., Van der Grein S.G., VasconcelosM.H., WaubenM.H.M., De Wever O. Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. J Extracell Vesicles. 2015 May; 4: 27066. doi: 10.3402/jev.v4.27066.Aghebati-Maleki A., Nami S., Baghbanzadeh A., Karzar B.H., Noorolyai S., FotouhiA., Aghebati-MalekiL. Implications of exosomes as diagnostic and therapeutic strategies in cancer. J Cell Physiol. 2019 Jun. doi: 10.1002/jcp.28875.Aghebati-Maleki A., Nami S., Baghbanzadeh A., Karzar B.H., Noorolyai S., FotouhiA., Aghebati-MalekiL. Implications of exosomes as diagnostic and therapeutic strategies in cancer. J Cell Physiol. 2019 Jun. doi: 10.1002/jcp.28875.Clark D.J., Fondrie W.E., Liao Z., Hanson P.I., Fulton A., Mao L., YangA.J. Redefining the breast cancer exosome proteome by tandem mass tag quantitative proteomics and multivariate cluster analysis. Anal Chem. 2015 Oct; 87(20): 10462-9. doi: 10.1021/acs.analchem.5b02586.Clark D.J., Fondrie W.E., Liao Z., Hanson P.I., Fulton A., Mao L., YangA.J. Redefining the breast cancer exosome proteome by tandem mass tag quantitative proteomics and multivariate cluster analysis. Anal Chem. 2015 Oct; 87(20): 10462-9. doi: 10.1021/acs.analchem.5b02586.Pant S., Hilton H., Burczynski M.E. The multifaceted exosome: biogenesis, role in normal and aberrant cellular function, and frontiers for pharmacological and biomarker opportunities. Biochem Pharmacol. 2012 Jun; 83(11): 1484-94. doi: 10.1016/j.bcp.2011.12.037.Pant S., Hilton H., Burczynski M.E. The multifaceted exosome: biogenesis, role in normal and aberrant cellular function, and frontiers for pharmacological and biomarker opportunities. Biochem Pharmacol. 2012 Jun; 83(11): 1484-94. doi: 10.1016/j.bcp.2011.12.037.Koumangoye R.B., SakweA.M., Goodwin J.S., Patel T., Ochieng J. Detachment of breast tumor cells induces rapid secretion of exosomes which subsequently mediate cellular adhesion and spreading. PLoS One. 2011 Sep; 6(9): e24234. doi: 10.1371/journal.pone.0024234.Koumangoye R.B., SakweA.M., Goodwin J.S., Patel T., Ochieng J. Detachment of breast tumor cells induces rapid secretion of exosomes which subsequently mediate cellular adhesion and spreading. PLoS One. 2011 Sep; 6(9): e24234. doi: 10.1371/journal.pone.0024234.Tamkovich S.N., Bakakina Y.S., Tutanov O.S., Somov A.K., Ki-rushina N.A., Dubovskaya L.V., Volotovski I.D., Laktionov P.P. Proteome analysis of circulating exosomes in health and breast cancer. Russian Journal of Bioorganic Chemistry 2017 Jul; 43(2): 126-34. doi: 10.1134/S1068162017020157.Tamkovich S.N., Bakakina Y.S., Tutanov O.S., Somov A.K., Ki-rushina N.A., Dubovskaya L.V., Volotovski I.D., Laktionov P.P. Proteome analysis of circulating exosomes in health and breast cancer. Russian Journal of Bioorganic Chemistry 2017 Jul; 43(2): 126-34. doi: 10.1134/S1068162017020157.ЛактионовП.П., Скворцова Т.Э., МорозкинЕ.С., Бондарь АА., МилейкоВ.А., Власов В.В.; ООО «ЦСБГеномика». Способ получения суммарной фракции внеклеточных нуклеиновых кислот из крови. Патент № 2554746 РФ, МПК G01N 33/48. № 2014120562/15; Заявл. 21.05.14; Опубл. 01.06.15.ЛактионовП.П., Скворцова Т.Э., МорозкинЕ.С., Бондарь АА., МилейкоВ.А., Власов В.В.; ООО «ЦСБГеномика». Способ получения суммарной фракции внеклеточных нуклеиновых кислот из крови. Патент № 2554746 РФ, МПК G01N 33/48. № 2014120562/15; Заявл. 21.05.14; Опубл. 01.06.15.GorgA., Weiss W. Horizontal SDS-PAGE for IPG-Dalt. Meth Mol Biol. 1999; 112: 235-44.GorgA., Weiss W. Horizontal SDS-PAGE for IPG-Dalt. Meth Mol Biol. 1999; 112: 235-44.Blum H., Beier H., Gross H.J. Improved silver staining of plant proteins, RNA and DNA in polyacrylamide gels. Electrophoresis. 1987 Feb; 8(2): 93-9. doi: 10.1002/elps.1150080203.Blum H., Beier H., Gross H.J. Improved silver staining of plant proteins, RNA and DNA in polyacrylamide gels. Electrophoresis. 1987 Feb; 8(2): 93-9. doi: 10.1002/elps.1150080203.Tamkovich S.N., Serdukov D.S., Tutanov O.S., Duzhak T. G., Laktionov P.P. Identification of proteins in blood nucleoprotein complexes. Russian Journal of Bioorganic Chemistry. 2015; 41(6): 617-25. doi: 10.1134/S1068162015060163.Tamkovich S.N., Serdukov D.S., Tutanov O.S., Duzhak T. G., Laktionov P.P. Identification of proteins in blood nucleoprotein complexes. Russian Journal of Bioorganic Chemistry. 2015; 41(6): 617-25. doi: 10.1134/S1068162015060163.Yang Q., Zhang Y., Cui H., Chen L., Zhao Y., Lin Y., Zhang M., Xie L. dbDEPC 3.0: the database of differentially expressed proteins in human cancer with multi-level annotation and drug indication. Database (Oxford). 2018; 2018: bay015. doi: 10.1093/database/bay015.Yang Q., Zhang Y., Cui H., Chen L., Zhao Y., Lin Y., Zhang M., Xie L. dbDEPC 3.0: the database of differentially expressed proteins in human cancer with multi-level annotation and drug indication. Database (Oxford). 2018; 2018: bay015. doi: 10.1093/database/bay015.Thery C., Witwer K.W., Aikawa E., Alcaraz MJ., Anderson J.D., Andriantsitohaina R., Antoniou A., Arab T., Archer F, Atkin-Smith G.K. Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MIS-EV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines. J Extracell Vesicles 2018 Nov; 7(1): 1535750. doi: 10.1080/20013078.2018.1535750.Thery C., Witwer K.W., Aikawa E., Alcaraz MJ., Anderson J.D., Andriantsitohaina R., Antoniou A., Arab T., Archer F, Atkin-Smith G.K. Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MIS-EV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines. J Extracell Vesicles 2018 Nov; 7(1): 1535750. doi: 10.1080/20013078.2018.1535750.Tamkovich S.N., Yunusova N.V, Somov A.K., Afanas’ev S.G., Kakurina G.V., Kolegova E.S., Tugutova EA., Laktionov P.P., Kondakova I.V Comparative subpopulation analysis of plasma exosomes from cancer patients. Biochemistry (Moscow) Supplement Series. B. Biomedical. Chemistry. 2018 Oct; 12(2): 151-5. doi: 10.1134/S1990750818020130.Tamkovich S.N., Yunusova N.V, Somov A.K., Afanas’ev S.G., Kakurina G.V., Kolegova E.S., Tugutova EA., Laktionov P.P., Kondakova I.V Comparative subpopulation analysis of plasma exosomes from cancer patients. Biochemistry (Moscow) Supplement Series. B. Biomedical. Chemistry. 2018 Oct; 12(2): 151-5. doi: 10.1134/S1990750818020130.Tamkovich S., Grigor’eva A., Eremina A., Tupikin A., Kabilov M., Chernykh V, Vlassov V, Ryabchikova E. What information can be obtained from the tears of a patient with primary open angle glaucoma? Clin Chem Acta 2019 Aug; 495: 529-37. doi: 10.1016/j.cca.2019.05.028.Tamkovich S., Grigor’eva A., Eremina A., Tupikin A., Kabilov M., Chernykh V, Vlassov V, Ryabchikova E. What information can be obtained from the tears of a patient with primary open angle glaucoma? Clin Chem Acta 2019 Aug; 495: 529-37. doi: 10.1016/j.cca.2019.05.028.Wu A.Y., Ueda K., Lai C.P. Proteomic analysis of extracellular vesicles for cancer diagnostics. Proteomics. 2019 Jan; 19(1-2): e1800162. doi: 10.1002/pmic.201800162.Wu A.Y., Ueda K., Lai C.P. Proteomic analysis of extracellular vesicles for cancer diagnostics. Proteomics. 2019 Jan; 19(1-2): e1800162. doi: 10.1002/pmic.201800162.Cufaro M.C., Pieragostino D., Lanuti P., Rossi C., Cicalini I., Federici L., De Laurenzi V., Del Boccio P. Extracellular vesicles and their potential use in monitoring cancer progression and therapy: the contribution of proteomics. J Oncol. 2019 Jun; 2019: 1639854. doi: 10.1155/2019/1639854.Cufaro M.C., Pieragostino D., Lanuti P., Rossi C., Cicalini I., Federici L., De Laurenzi V., Del Boccio P. Extracellular vesicles and their potential use in monitoring cancer progression and therapy: the contribution of proteomics. J Oncol. 2019 Jun; 2019: 1639854. doi: 10.1155/2019/1639854.Boukouris S., Mathivanan S. Exosomes in bodily fluids are a highly stable resource of disease biomarkers. Proteomics Clin Appl. 2015 Apr; 9(3-4): 358-67. doi: 10.1002/prca.201400114.Boukouris S., Mathivanan S. Exosomes in bodily fluids are a highly stable resource of disease biomarkers. Proteomics Clin Appl. 2015 Apr; 9(3-4): 358-67. doi: 10.1002/prca.201400114.Nazarenko I., Rana S., Baumann A., McAlear J., Hellwig A., TrendelenburgM., Lochnit G., PreissnerK.T., ZollerM. Cell surface tet-raspanin Tspan8 contributes to molecular pathways of exosome-induced endothelial cell activation. Cancer Res. 2010 Feb; 70(4): 1668-78. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-09-2470.Nazarenko I., Rana S., Baumann A., McAlear J., Hellwig A., TrendelenburgM., Lochnit G., PreissnerK.T., ZollerM. Cell surface tet-raspanin Tspan8 contributes to molecular pathways of exosome-induced endothelial cell activation. Cancer Res. 2010 Feb; 70(4): 1668-78. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-09-2470.Mathivanan S., Ji H., Simpson R.J. Exosomes: extracellular organelles important in intercellular communication. J Proteomics 2010 Sep; 73(10): 1907-20. doi: 10.1016/j.jprot.2010.06.006.Mathivanan S., Ji H., Simpson R.J. Exosomes: extracellular organelles important in intercellular communication. J Proteomics 2010 Sep; 73(10): 1907-20. doi: 10.1016/j.jprot.2010.06.006.Calzolari A., Raggi C., Deaglio S., Sposi N.M., Stafsnes M., Fecchi K., Parolini I., Malavasi F, Peschle C., Sargiacomo M., Testa U. TfR2 localizes in lipid raft domains and is released in exosomes to activate signal transduction along the MAPK pathway. J Cell Sci. 2006 Nov; 119: 4486-98.Calzolari A., Raggi C., Deaglio S., Sposi N.M., Stafsnes M., Fecchi K., Parolini I., Malavasi F, Peschle C., Sargiacomo M., Testa U. TfR2 localizes in lipid raft domains and is released in exosomes to activate signal transduction along the MAPK pathway. J Cell Sci. 2006 Nov; 119: 4486-98.Clayton A., Turkes A., Dewitt S., Steadman R., Mason M.D., Hal-lett M.B. Adhesion and signaling by B cell-derived exosomes: the role of integrins. FASEB J. 2004 Jun; 18(9): 977-9.Clayton A., Turkes A., Dewitt S., Steadman R., Mason M.D., Hal-lett M.B. Adhesion and signaling by B cell-derived exosomes: the role of integrins. FASEB J. 2004 Jun; 18(9): 977-9.Danesh A., Inglis H.C., Jackman R.P., Wu S., Deng X., Muench M.O., Heitman J.W., Norris PJ. Exosomes from red blood cell units bind to monocytes and induce proinflammatory cytokines, boosting T-cell responses in vitro. Blood 2014 Jan; 123(5): 687-96. doi: 10.1182/blood-2013-10-530469.Danesh A., Inglis H.C., Jackman R.P., Wu S., Deng X., Muench M.O., Heitman J.W., Norris PJ. Exosomes from red blood cell units bind to monocytes and induce proinflammatory cytokines, boosting T-cell responses in vitro. Blood 2014 Jan; 123(5): 687-96. doi: 10.1182/blood-2013-10-530469.Minciacchi VR., FreemanM.R., Di VizioD. Extracellular vesicles in cancer: exosomes, microvesicles and the emerging role of large on-cosomes. Semin Cell Dev Biol. 2015 Apr; 40: 41-51. doi: 10.1016/j.semcdb.2015.02.010.Minciacchi VR., FreemanM.R., Di VizioD. Extracellular vesicles in cancer: exosomes, microvesicles and the emerging role of large on-cosomes. Semin Cell Dev Biol. 2015 Apr; 40: 41-51. doi: 10.1016/j.semcdb.2015.02.010.Tamkovich S., Tutanov O., Efimenko A., Grigor’eva A., Ryabchikova E., Kirushina N., Vlassov V, Tkachuk V, Laktionov P. Blood circulating exosomes contain distinguishable fractions of free and cell-surface-associated vesicles. Curr Mol Med. 2019 Mar; 19(4): 273-85. doi: 10.2174/1566524019666190314120532.Tamkovich S., Tutanov O., Efimenko A., Grigor’eva A., Ryabchikova E., Kirushina N., Vlassov V, Tkachuk V, Laktionov P. Blood circulating exosomes contain distinguishable fractions of free and cell-surface-associated vesicles. Curr Mol Med. 2019 Mar; 19(4): 273-85. doi: 10.2174/1566524019666190314120532.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.