oncotomskСибирский онкологический журналSiberian journal of oncology1814-48612312-3168Tomsk National Research Medical Сепtеr of the Russian Academy of Sciences10.21294/1814-4861-2026-25-2-80-93oncotomsk-4202Research ArticleЛАБОРАТОРНЫЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯLABORATORY AND EXPERIMENTAL STUDIESКомбинированная терапия темозоломидом и онколитическими вирусами потенцирует апоптоз и ингибирует миграционную активность клеток глиобластомы in vitroCombination of temozolomide and oncolytic viral therapy potentiates apoptosis and inhibits cell migration of glioblastoma in vitrohttps://orcid.org/0000-0002-0583-443XРоманишинА. О.RomanishinA. O.

Романишин Александр Олегович - инженер-лаборант лаборатории трансляционных исследований, ОНК «Институт медицины и наук о жизни»

SPIN-код: 7775-3921

Author ID (Scopus): 57216789798

236041, Калининград, ул. Университетская, 2

Alexander O. Romanishin - Engineer, Laboratory of Translational Research, Institute of Medicine and Life Sciences

Author ID (Scopus): 57216789798

2, Universitetskaya St., Kaliningrad, 236041

romanishin.alexander97@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9288-842XВасильевА. А.VasilevA. A.

Васильев Александр Александрович - кандидат биологических наук, младший научный сотрудник лаборатории трансляционных исследований, ОНК «Институт медицины и наук о жизни»

Author ID (Scopus): 59117338100

236041, Калининград, ул. Университетская, 2

Alexander A. Vasilev - PhD, Junior Researcher, Laboratory of Translational Research, Institute of Medicine and Life Sciences

Author ID (Scopus): 59117338100

2, Universitetskaya St., Kaliningrad, 236041

https://orcid.org/0000-0001-9885-9056СысоеваВ. Ю.SysoevaV. Yu.

Сысоева Вероника Юрьевна - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории морфогенеза и репарации тканей, факультет фундаментальной медицины, Медицинский научно-образовательный институт

SPIN-код: 9473-2564

ResearcherID (WOS): ABA-1184-2021

Author ID (Scopus): 6603150390

119234, Москва, Ломоносовский пр-кт, 27, к. 1

Veronika Yu. Sysoeva - PhD, Leading Researcher, Laboratory of Mechanisms of Morphogenesis and Tissue Repair, Faculty of Fundamental Medicine, Medical Research and Education Institute

ResearcherID (WOS): ABA-1184-2021

Author ID (Scopus): 6603150390

27, Bld. 1, Lomonosovsky Prospekt, Moscow, 119234

https://orcid.org/0000-0002-7166-7406РубинаК. А.RubinaK. A.

Рубина Ксения Андреевна - доктор биологических наук, профессор РАН, заведующая лабораторией морфогенеза и репарации тканей, факультет фундаментальной медицины, Медицинский научно-образовательный институт

SPIN-код: 9471-2511

ResearcherID (WOS): A-8208-2014

Author ID (Scopus): 7004199601

119234, Москва, Ломоносовский пр-кт, 27, к. 1

Ksenia A. Rubina - DSc, Professor of Russian Academy of Science, Head of Laboratory of Mechanisms of Morphogenesis and Tissue Repair, Faculty of Fundamental Medicine, Medical Research and Education Institute

ResearcherID (WOS): A-8208-2014

Author ID (Scopus): 7004199601

27, Bld. 1, Lomonosovsky Prospekt, Moscow, 119234

https://orcid.org/0000-0002-3927-9286СеминаЕ. В.SeminaE. V.

Семина Екатерина Владимировна - доктор биологических наук, заведующая лабораторией трансляционных исследований, ОНК «Институт медицины и наук о жизни», ФГАОУ ВО «Балтийский ФУ им. И. Канта»; ведущий научный сотрудник лаборатории морфогенеза и репарации тканей, факультет фундаментальной медицины, Медицинский научно-образовательный институт, ФГБОУ ВО «МГУ им. М. Ломоносова»

SPIN-код: 4586-4001

ResearcherID (WOS): A-8184-2014

Author ID (Scopus): 35081127300

236041, Калининград, ул. Университетская, 2; 119234, Москва, Ломоносовский пр-кт, 27, к. 1

Ekaterina V. Semina - DSc, Head of Laboratory of Translational Research, Institute of Medicine and Life Sciences, I. Kant BFU; Leading Researcher, Laboratory of Mechanisms of Morphogenesis and Tissue Repair, Faculty of Fundamental Medicine, Medical Research and Education Institute, Lomonosov MSU

ResearcherID (WOS): A-8184-2014

Author ID (Scopus): 35081127300

2, Universitetskaya St., Kaliningrad, 236041; 27, Bld. 1, Lomonosovsky Prospekt, Moscow, 119234

Лаборатория трансляционных исследований, ОНК «Институт медицины и наук о жизни», ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет им. И. Канта»РоссияLaboratory of Translational Research, institute of Medicine and life Sciences, I. Kant Baltic Federal UniversityRussian FederationЛаборатория морфогенеза и репарации тканей, Медицинский научно-образовательный институт, ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова»РоссияLaboratory of Mechanisms of Morphogenesis and Tissue Repair, Medical Research and Education institute, Lomonosov Moscow State UniversityRussian FederationЛаборатория трансляционных исследований, ОНК «Институт медицины и наук о жизни», ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет им. И. Канта»; Лаборатория морфогенеза и репарации тканей, Медицинский научно-образовательный институт, ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова»РоссияLaboratory of Translational Research, institute of Medicine and life Sciences, I. Kant Baltic Federal University; Laboratory of Mechanisms of Morphogenesis and Tissue Repair, Medical Research and Education institute, Lomonosov Moscow State UniversityRussian Federation2026170520262528093Copyright © Романишин А.О., Васильев А.А., Сысоева В.Ю., Рубина К.А., Семина Е.В., 20262026Романишин А.О., Васильев А.А., Сысоева В.Ю., Рубина К.А., Семина Е.В.Romanishin A.O., Vasilev A.A., Sysoeva V.Y., Rubina K.A., Semina E.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.siboncoj.ru/jour/article/view/4202Введение

Введение. Глиобластома (ГБМ) – наиболее агрессивная форма глиомы – остается одним из самых опасных опухолевых заболеваний ЦНС, и, несмотря на существующие стандартные протоколы лечения, медиана выживаемости пациентов остается крайне низкой. Перспективным направлением в терапии ГБМ являются онколитические вирусы: в частности, простая и контролируемая система, основанная на индукции апоптоза с помощью вирусной тимидинкиназы Herpes simplex и ганцикловира, система «тимидинкиназа – ганцикловир» (ТК-ГЦВ), представляет значительный терапевтический интерес. Комбинация данного подхода с темозоломидом (ТМЗ), стандартным химиотерапевтическим агентом, позволяет одновременно воздействовать на ключевые механизмы выживания опухолевых клеток: подавление репарации ДНК и активацию апоптотической гибели. Такое комбинированное воздействие потенциально может значительно повысить эффективность терапии глиобластомы.

Цель исследования – оценить влияние комбинированного воздействия системы «тимидинкиназа – ганцикловир» (ТК-ГЦВ) и темозоломида (ТМЗ) на жизнеспособность и миграционную активность клеток глиобластомы (ГБМ) in vitro.

Материал и методы

Материал и методы. В работе использовали клеточные линии глиобластомы человека U87 и U251, линии эпителия почки HEK293Т/17 и первичные мезенхимальные стволовые клетки человека (МСК). Методом генной инженерии на основе плазмиды, кодирующей тимидинкиназу, были получены рекомбинантные вирусные частицы для трансдукции. Для темозоломида (ТМЗ) и ганцикловира (ГЦВ) подобраны оптимальные концентрации. Жизнеспособность оценивали с помощью MTT-теста; анализ клеточного цикла (фаза G2/M) и экспрессию белка Bax проводили методом проточной цитометрии; экспрессию генов эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП) – с помощью количественной ПЦР; миграционную активность – в тесте «заживления раны» in vitro.

Результаты

Результаты. Сочетанное воздействие ТМЗ и системы ТК-ГЦВ приводит к достоверному усилению гибели опухолевых клеток по сравнению с моновоздействием; цитотоксический эффект характеризуется значительным увеличением доли клеток глиобластом с признаками апоптоза. Среди анализируемых маркеров ЭМП в клетках глиобластом наиболее выраженное подавление экспрессии наблюдается у генов CD44, ZEB1, SNAI1, SNAI2 и VIM.

Заключение

Заключение. Комбинированная терапия темозоломидом и системой ТК-ГЦВ обладает синергетическим эффектом, достоверно увеличивая гибель клеток глиобластомы и подавляя их миграционную активность по сравнению с применением каждого из агентов в отдельности.

Background

Background. Glioblastoma (GBM) is the most aggressive and malignant type of glioma, representing the most common and lethal primary central nervous system (CNS) neoplasm in adults. Despite current therapeutic approaches, the median overall survival remains low. Oncolytic virotherapy is a highly promising alternative strategy. One such approach utilizes the Herpes Simplex Virus Thymidine Kinase (HSV-TK) enzyme combined with the prodrug ganciclovir (GCV). This TK-GCV system is converted into a toxic metabolite that induces apoptosis in target cells. Combining the TK-GCV system with temozolomide (TMZ), the standard first-line chemotherapeutic agent for glioma, targets two critical survival mechanisms of GBM: DNA repair and apoptosis regulation. This combination has the potential to significantly improve therapeutic efficacy.

Aim

Aim. We evaluated the impact of combined TK-GCV and TMZ therapy on glioblastoma cell viability and migratory capacity in vitro.

Material and Methods

Material and Methods. This work employed the following cell lines: GBM cell lines U87-MG and U251-MG, HEK293T/17 cells, and human mesenchymal stem cells. Recombinant viral particles encoding the thymidine kinase (TK) gene were generated using genetic engineering techniques. Optimal concentrations of TMZ and GCV were determined. Cell viability was assessed using the MTT assay; cell cycle distribution (G2/M phase) and Bax expression were analyzed by flow cytometry; gene expression was quantified via quantitative PCR (qPCR); and cell migration was measured using a wound-healing assay.

Results

Results. The combination of TMZ and the TK-GCV system results in a significant increase in GBM cell death compared to monotherapy. Specifically, this enhanced cell death is characterized by a higher proportion of apoptotic cells. Furthermore, expression levels of EMT markers such as CD44, ZEB1, SNAI1, SNAI2, and VIM were significantly reduced under the combined treatment of TK-GCV and TMZ.

Conclusion

Conclusion. The combination of TK-GCV and TMZ demonstrates a synergistic effect between the two therapeutic approaches. Compared to each method administered separately, the combined treatment results in increased GBM cell death and reduced cell migration.

глиобластоматемозоломидонколитические вирусымиграцияglioblastomatemozolomideoncolytic virusmigrationРабота была выполнена при поддержке федеральной программы академического лидерства «Приоритет-2030» и Государственного задания МГУ имени М.В. Ломоносова № 03р-23/110-03This research was supported from the Russian Federal Academic Leadership Program Priority 2030 at the Immanuel Kant Baltic Federal University and by Russian Federation under the State Assignment No. 03r23/110-03 of Lomonosov Moscow State UniversityReferencesStupp R., Mason W.P., van den Bent M.J., Weller M., Fisher B., Taphoorn M.J., Belanger K., Brandes A.A., Marosi C., Bogdahn U., Curschmann J., Janzer R.C., Ludwin S.K., Gorlia T., Allgeier A., Lacombe D., Cairncross J.G., Eisenhauer E., Mirimanoff R.O.; European Organisation for Research and Treatment of Cancer Brain Tumor and Radiotherapy Groups; National Cancer Institute of Canada Clinical Trials Group. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N Engl J Med. 2005; 10; 352(10): 987–96. doi: 10.1056/NEJMoa043330.Stupp R., Mason W.P., van den Bent M.J., Weller M., Fisher B., Taphoorn M.J., Belanger K., Brandes A.A., Marosi C., Bogdahn U., Curschmann J., Janzer R.C., Ludwin S.K., Gorlia T., Allgeier A., Lacombe D., Cairncross J.G., Eisenhauer E., Mirimanoff R.O.; European Organisation for Research and Treatment of Cancer Brain Tumor and Radiotherapy Groups; National Cancer Institute of Canada Clinical Trials Group. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N Engl J Med. 2005; 10; 352(10): 987–96. doi: 10.1056/NEJMoa043330.Ботезату И.В., Кондратова В.Н., Строганова А.М., Дранко С.Л., Насхлеташвили Д.Р., Лихтенштейн A.В. Метилирование промотора гена MGMT как прогностический маркер глиобластомы. Успехи молекулярной онкологии. 2025; 12(3): 70–77. doi: 10.17650/2313-805X-2025-12-3-70-77. EDN: MVJLUP.Botezatu I.V., Kondratova V.N., Stroganova A.M., Dranko S.L., Naskhletashvili D.R., Lichtenstein A.V. Methylation of MGMT promoter as a prognostic marker of glioblastoma. Advances in Molecular Oncology. 2025; 12(3): 70–77. (in Russian). doi: 10.17650/2313-805X-2025-12-3-70-77. EDN: MVJLUP.Gulaia V., Shmelev M., Romanishin A., Shved N., Farniev V., Goncharov N., Biktimirov A., Vargas I.L., Khodosevich K., Kagansky A., Kumeiko V. Single-nucleus transcriptomics of IDH1and TP53-mutant glioma stem cells displays diversified commitment on invasive cancer progenitors. Sci Rep. 2022; 12(1): 18975. doi: 10.1038/s41598-022-23646-3.Gulaia V., Shmelev M., Romanishin A., Shved N., Farniev V., Goncharov N., Biktimirov A., Vargas I.L., Khodosevich K., Kagansky A., Kumeiko V. Single-nucleus transcriptomics of IDH1and TP53-mutant glioma stem cells displays diversified commitment on invasive cancer progenitors. Sci Rep. 2022; 12(1): 18975. doi: 10.1038/s41598-022-23646-3.Antonica F., Santomaso L., Pernici D., Petrucci L., Aiello G., Cutarelli A., Conti L., Romanel A., Miele E., Tebaldi T., Tiberi L. A slowcycling/quiescent cells subpopulation is involved in glioma invasiveness. Nat Commun. 2022; 13(1): 4767. doi: 10.1038/s41467-022-32448-0.Antonica F., Santomaso L., Pernici D., Petrucci L., Aiello G., Cutarelli A., Conti L., Romanel A., Miele E., Tebaldi T., Tiberi L. A slowcycling/quiescent cells subpopulation is involved in glioma invasiveness. Nat Commun. 2022; 13(1): 4767. doi: 10.1038/s41467-022-32448-0.Erices J.I., Bizama C., Niechi I., Uribe D., Rosales A., Fabres K., Navarro-Martínez G., Torres Á., San Martín R., Roa J.C., Quezada-Monrás C. Glioblastoma Microenvironment and Invasiveness: New Insights and Therapeutic Targets. Int J Mol Sci. 2023; 24(8): 7047. doi: 10.3390/ijms24087047.Erices J.I., Bizama C., Niechi I., Uribe D., Rosales A., Fabres K., Navarro-Martínez G., Torres Á., San Martín R., Roa J.C., Quezada-Monrás C. Glioblastoma Microenvironment and Invasiveness: New Insights and Therapeutic Targets. Int J Mol Sci. 2023; 24(8): 7047. doi: 10.3390/ijms24087047.Adjei-Sowah E.A., O’Connor S.A., Veldhuizen J., Lo Cascio C., Plaisier C., Mehta S., Nikkhah M. Investigating the Interactions of Glioma Stem Cells in the Perivascular Niche at Single-Cell Resolution using a Microfluidic Tumor Microenvironment Model. Adv Sci (Weinh). 2022; 9(21): e2201436. doi: 10.1002/advs.202201436.Adjei-Sowah E.A., O’Connor S.A., Veldhuizen J., Lo Cascio C., Plaisier C., Mehta S., Nikkhah M. Investigating the Interactions of Glioma Stem Cells in the Perivascular Niche at Single-Cell Resolution using a Microfluidic Tumor Microenvironment Model. Adv Sci (Weinh). 2022; 9(21): e2201436. doi: 10.1002/advs.202201436.Putavet D.A., de Keizer P.L.J. Residual Disease in Glioma Recurrence: A Dangerous Liaison with Senescence. Cancers (Basel). 2021; 13(7): 1560. doi: 10.3390/cancers13071560.Putavet D.A., de Keizer P.L.J. Residual Disease in Glioma Recurrence: A Dangerous Liaison with Senescence. Cancers (Basel). 2021; 13(7): 1560. doi: 10.3390/cancers13071560.Masud N., Hasib M.H.H., Ibironke B., Block C., Hughes J., Ekpenyong A., Sarkar A. Exploring the heterogeneity in glioblastoma cellular mechanics using in-vitro assays and atomic force microscopy. Sci Rep. 2025; 15(1): 19302. doi: 10.1038/s41598-025-04841-4.Masud N., Hasib M.H.H., Ibironke B., Block C., Hughes J., Ekpenyong A., Sarkar A. Exploring the heterogeneity in glioblastoma cellular mechanics using in-vitro assays and atomic force microscopy. Sci Rep. 2025; 15(1): 19302. doi: 10.1038/s41598-025-04841-4.Zhao W., Xie Q. Exosomal lncRNA-Mediated Intercellular Communication Promotes Glioblastoma Chemoresistance. Cancer Immunol Res. 2021; 9(12): 1372. doi: 10.1158/2326-6066.CIR-21-0846.Zhao W., Xie Q. Exosomal lncRNA-Mediated Intercellular Communication Promotes Glioblastoma Chemoresistance. Cancer Immunol Res. 2021; 9(12): 1372. doi: 10.1158/2326-6066.CIR-21-0846.Ellert-Miklaszewska A., Poleszak K., Pasierbinska M., Kaminska B. Integrin Signaling in Glioma Pathogenesis: From Biology to Therapy. Int J Mol Sci. 2020; 21(3): 888. doi: 10.3390/ijms21030888.Ellert-Miklaszewska A., Poleszak K., Pasierbinska M., Kaminska B. Integrin Signaling in Glioma Pathogenesis: From Biology to Therapy. Int J Mol Sci. 2020; 21(3): 888. doi: 10.3390/ijms21030888.Wang Z., Mo Y., Tan Y., Wen Z., Dai Z., Zhang H., Zhang X., Feng S., Liang X., Song T., Cheng Q. The ALDH Family Contributes to Immunocyte Infiltration, Proliferation and Epithelial-Mesenchymal Transformation in Glioma. Front Immunol. 2022; 12:756606. doi: 10.3389/fimmu.2021.756606.Wang Z., Mo Y., Tan Y., Wen Z., Dai Z., Zhang H., Zhang X., Feng S., Liang X., Song T., Cheng Q. The ALDH Family Contributes to Immunocyte Infiltration, Proliferation and Epithelial-Mesenchymal Transformation in Glioma. Front Immunol. 2022; 12:756606. doi: 10.3389/fimmu.2021.756606.Malhotra J., Kim E.S. Oncolytic Viruses and Cancer Immunotherapy. Curr Oncol Rep. 2023; 25(1): 19–28. doi: 10.1007/s11912-022-01341-w.Malhotra J., Kim E.S. Oncolytic Viruses and Cancer Immunotherapy. Curr Oncol Rep. 2023; 25(1): 19–28. doi: 10.1007/s11912-022-01341-w.Yang R., Hedberg J., Montagano J., Seals M., Puri S. Oncolytic Virus Therapies in Malignant Gliomas: Advances and Clinical Trials. Cancers (Basel). 2025; 17(19): 3180. doi: 10.3390/cancers17193180.Yang R., Hedberg J., Montagano J., Seals M., Puri S. Oncolytic Virus Therapies in Malignant Gliomas: Advances and Clinical Trials. Cancers (Basel). 2025; 17(19): 3180. doi: 10.3390/cancers17193180.Faisal S.M., Castro M.G., Lowenstein P.R. Combined cytotoxic and immune-stimulatory gene therapy using Ad-TK and Ad-Flt3L: Translational developments from rodents to glioma patients. Mol Ther. 2023; 31(10): 2839–60. doi: 10.1016/j.ymthe.2023.08.009.Faisal S.M., Castro M.G., Lowenstein P.R. Combined cytotoxic and immune-stimulatory gene therapy using Ad-TK and Ad-Flt3L: Translational developments from rodents to glioma patients. Mol Ther. 2023; 31(10): 2839–60. doi: 10.1016/j.ymthe.2023.08.009.Romanishin A., Vasilev A., Khasanshin E., Evtekhov A., Pusynin E., Rubina K., Kakotkin V., Agapov M., Semina E. Oncolytic viral therapy for gliomas: Advances in the mechanisms and approaches to delivery. Virology. 2024; 593: 110033. doi: 10.1016/j.virol.2024.110033.Romanishin A., Vasilev A., Khasanshin E., Evtekhov A., Pusynin E., Rubina K., Kakotkin V., Agapov M., Semina E. Oncolytic viral therapy for gliomas: Advances in the mechanisms and approaches to delivery. Virology. 2024; 593: 110033. doi: 10.1016/j.virol.2024.110033.Oishi T., Ito M., Koizumi S., Horikawa M., Yamamoto T., Yamagishi S., Yamasaki T., Sameshima T., Suzuki T., Sugimura H., Namba H., Kurozumi K. Efficacy of HSV-TK/GCV system suicide gene therapy using SHED expressing modified HSV-TK against lung cancer brain metastases. Mol Ther Methods Clin Dev. 2022; 26: 253–65. doi: 10.1016/j.omtm.2022.07.001.Oishi T., Ito M., Koizumi S., Horikawa M., Yamamoto T., Yamagishi S., Yamasaki T., Sameshima T., Suzuki T., Sugimura H., Namba H., Kurozumi K. Efficacy of HSV-TK/GCV system suicide gene therapy using SHED expressing modified HSV-TK against lung cancer brain metastases. Mol Ther Methods Clin Dev. 2022; 26: 253–65. doi: 10.1016/j.omtm.2022.07.001.Luo E.W., Liao M.L., Chien C.L. Neural differentiation of glioblastoma cell lines via a herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir system driven by a glial fibrillary acidic protein promoter. PLoS One. 2021; 16(8): e0253008. doi: 10.1371/journal.pone.0253008.Luo E.W., Liao M.L., Chien C.L. Neural differentiation of glioblastoma cell lines via a herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir system driven by a glial fibrillary acidic protein promoter. PLoS One. 2021; 16(8): e0253008. doi: 10.1371/journal.pone.0253008.Erickson N.J., Stavarache M., Tekedereli I., Kaplitt M.G., Markert J.M. Herpes Simplex Oncolytic Viral Therapy for Malignant Glioma and Mechanisms of Delivery. World Neurosurg. 2025; 194: 123595. doi: 10.1016/j.wneu.2024.123595.Erickson N.J., Stavarache M., Tekedereli I., Kaplitt M.G., Markert J.M. Herpes Simplex Oncolytic Viral Therapy for Malignant Glioma and Mechanisms of Delivery. World Neurosurg. 2025; 194: 123595. doi: 10.1016/j.wneu.2024.123595.Liskovykh M., Chuykin I., Ranjan A., Safina D., Popova E., Tolkunova E., Mosienko V., Minina J.M., Zhdanova N.S., Mullins J.J., Bader M., Alenina N., Tomilin A. Derivation, characterization, and stable transfection of induced pluripotent stem cells from Fischer344 rats. PLoS One. 2011; 6(11): e27345. doi: 10.1371/journal.pone.0027345.Liskovykh M., Chuykin I., Ranjan A., Safina D., Popova E., Tolkunova E., Mosienko V., Minina J.M., Zhdanova N.S., Mullins J.J., Bader M., Alenina N., Tomilin A. Derivation, characterization, and stable transfection of induced pluripotent stem cells from Fischer344 rats. PLoS One. 2011; 6(11): e27345. doi: 10.1371/journal.pone.0027345.Coleman J.E., Huentelman M.J., Kasparov S., Metcalfe B.L., Paton J.F., Katovich M.J., Semple-Rowland S.L., Raizada M.K. Efficient large-scale production and concentration of HIV-1-based lentiviral vectors for use in vivo. Physiol Genomics. 2003; 12(3): 221–28. doi: 10.1152/physiolgenomics.00135.2002.Coleman J.E., Huentelman M.J., Kasparov S., Metcalfe B.L., Paton J.F., Katovich M.J., Semple-Rowland S.L., Raizada M.K. Efficient large-scale production and concentration of HIV-1-based lentiviral vectors for use in vivo. Physiol Genomics. 2003; 12(3): 221–28. doi: 10.1152/physiolgenomics.00135.2002.Koessinger A.L., Cloix C., Koessinger D., Heiland D.H., Bock F.J., Strathdee K., Kinch K., Martínez-Escardó L., Paul N.R., Nixon C., Malviya G., Jackson M.R., Campbell K.J., Stevenson K., Davis S,. Elmasry Y., Ahmed A., O’Prey J., Ichim G., Schnell O., Stewart W., Blyth K., Ryan K.M., Chalmers A.J., Norman J.C., Tait S.W.G. Increased apoptotic sensitivity of glioblastoma enables therapeutic targeting by BH3-mimetics. Cell Death Differ. 2022; 29(10): 2089–104. doi: 10.1038/s41418-022-01001-3.Koessinger A.L., Cloix C., Koessinger D., Heiland D.H., Bock F.J., Strathdee K., Kinch K., Martínez-Escardó L., Paul N.R., Nixon C., Malviya G., Jackson M.R., Campbell K.J., Stevenson K., Davis S,. Elmasry Y., Ahmed A., O’Prey J., Ichim G., Schnell O., Stewart W., Blyth K., Ryan K.M., Chalmers A.J., Norman J.C., Tait S.W.G. Increased apoptotic sensitivity of glioblastoma enables therapeutic targeting by BH3-mimetics. Cell Death Differ. 2022; 29(10): 2089–104. doi: 10.1038/s41418-022-01001-3.Foucquier J., Guedj M. Analysis of drug combinations: current methodological landscape. Pharmacol Res Perspect. 2015; 3(3): e00149. doi: 10.1002/prp2.149.Foucquier J., Guedj M. Analysis of drug combinations: current methodological landscape. Pharmacol Res Perspect. 2015; 3(3): e00149. doi: 10.1002/prp2.149.Madhavan K., Balakrishnan I., Lakshmanachetty S., Pierce A., Sanford B., Fosmire S., Elajaili H.B., Walker F., Wang D., Nozik E.S., Mitra S.S., Dahl N.A., Vibhakar R., Venkataraman S. Venetoclax Cooperates with Ionizing Radiation to Attenuate Diffuse Midline Glioma Tumor Growth. Clin Cancer Res. 2022; 28(11): 2409–24. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-21-4002.Madhavan K., Balakrishnan I., Lakshmanachetty S., Pierce A., Sanford B., Fosmire S., Elajaili H.B., Walker F., Wang D., Nozik E.S., Mitra S.S., Dahl N.A., Vibhakar R., Venkataraman S. Venetoclax Cooperates with Ionizing Radiation to Attenuate Diffuse Midline Glioma Tumor Growth. Clin Cancer Res. 2022; 28(11): 2409–24. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-21-4002.Rainov N.G., Fels C., Droege J.W., Schäfer C., Kramm C.M., Chou T.C. Temozolomide enhances herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir therapy of malignant glioma. Cancer Gene Therapy. 2001; 8(9): 662–68.Rainov N.G., Fels C., Droege J.W., Schäfer C., Kramm C.M., Chou T.C. Temozolomide enhances herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir therapy of malignant glioma. Cancer Gene Therapy. 2001; 8(9): 662–68.Poon M.T.C., Bruce M., Simpson J.E., Hannan C.J., Brennan P.M. Temozolomide sensitivity of malignant glioma cell lines – a systematic review assessing consistencies between in vitro studies. BMC Cancer. 2021; 21(1): 1240. doi: 10.1186/s12885-021-08972-5.Poon M.T.C., Bruce M., Simpson J.E., Hannan C.J., Brennan P.M. Temozolomide sensitivity of malignant glioma cell lines – a systematic review assessing consistencies between in vitro studies. BMC Cancer. 2021; 21(1): 1240. doi: 10.1186/s12885-021-08972-5.Jezierzański M., Nafalska N., Stopyra M., Furgoł T., Miciak M., Kabut J., Gisterek-Grocholska I. Temozolomide (TMZ) in the Treatment of Glioblastoma Multiforme-A Literature Review and Clinical Outcomes. Curr Oncol. 2024; 31(7): 3994–4002. doi: 10.3390/curroncol31070296.Jezierzański M., Nafalska N., Stopyra M., Furgoł T., Miciak M., Kabut J., Gisterek-Grocholska I. Temozolomide (TMZ) in the Treatment of Glioblastoma Multiforme-A Literature Review and Clinical Outcomes. Curr Oncol. 2024; 31(7): 3994–4002. doi: 10.3390/curroncol31070296.Chen Q., Wang W., Chen S., Chen X., Lin Y. miR-29a sensitizes the response of glioma cells to temozolomide by modulating the P53/ MDM2 feedback loop. Cell Mol Biol Lett. 2021; 26(1):21. doi: 10.1186/s11658-021-00266-9.Chen Q., Wang W., Chen S., Chen X., Lin Y. miR-29a sensitizes the response of glioma cells to temozolomide by modulating the P53/ MDM2 feedback loop. Cell Mol Biol Lett. 2021; 26(1):21. doi: 10.1186/s11658-021-00266-9.Voce D.J., Bernal G.M., Wu L., Crawley C.D., Zhang W., Mansour N.M., Cahill K.E., Szymura S.J., Uppal A., Raleigh D.R., Spretz R., Nunez L., Larsen G., Khodarev N.N., Weichselbaum R.R., Yamini B. Temozolomide Treatment Induces lncRNA MALAT1 in an NF-κB and p53 Codependent Manner in Glioblastoma. Cancer Res. 2019; 79(10): 2536–48. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-18-2170.Voce D.J., Bernal G.M., Wu L., Crawley C.D., Zhang W., Mansour N.M., Cahill K.E., Szymura S.J., Uppal A., Raleigh D.R., Spretz R., Nunez L., Larsen G., Khodarev N.N., Weichselbaum R.R., Yamini B. Temozolomide Treatment Induces lncRNA MALAT1 in an NF-κB and p53 Codependent Manner in Glioblastoma. Cancer Res. 2019; 79(10): 2536–48. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-18-2170.Lanskikh D., Kuziakova O., Baklanov I., Penkova A., Doroshenko V., Buriak I., Zhmenia V., Kumeiko V. Cell-Based Glioma Models for Anticancer Drug Screening: From Conventional Adherent Cell Cultures to Tumor-Specific Three-Dimensional Constructs. Cells. 2024; 13(24): 2085. doi: 10.3390/cells13242085.Lanskikh D., Kuziakova O., Baklanov I., Penkova A., Doroshenko V., Buriak I., Zhmenia V., Kumeiko V. Cell-Based Glioma Models for Anticancer Drug Screening: From Conventional Adherent Cell Cultures to Tumor-Specific Three-Dimensional Constructs. Cells. 2024; 13(24): 2085. doi: 10.3390/cells13242085.Alomari O., Eyvazova H., Güney B., Al Juhmani R., Odabasi H., Al-Rawabdeh L., Mokresh M.E., Erginoglu U., Keles A., Baskaya M.K. Oncolytic Therapies for Glioblastoma: Advances, Challenges, and Future Perspectives. Cancers (Basel). 2025; 17(15): 2550. doi: 10.3390/cancers17152550.Alomari O., Eyvazova H., Güney B., Al Juhmani R., Odabasi H., Al-Rawabdeh L., Mokresh M.E., Erginoglu U., Keles A., Baskaya M.K. Oncolytic Therapies for Glioblastoma: Advances, Challenges, and Future Perspectives. Cancers (Basel). 2025; 17(15): 2550. doi: 10.3390/cancers17152550.Ageenko A., Vasileva N., Richter V., Kuligina E. Combination of Oncolytic Virotherapy with Different Antitumor Approaches against Glioblastoma. Int J Mol Sci. 2024; 25(4): 2042. doi: 10.3390/ijms25042042.Ageenko A., Vasileva N., Richter V., Kuligina E. Combination of Oncolytic Virotherapy with Different Antitumor Approaches against Glioblastoma. Int J Mol Sci. 2024; 25(4): 2042. doi: 10.3390/ijms25042042.Fan J., Jiang H., Cheng L., Ma B., Liu R. Oncolytic herpes simplex virus and temozolomide synergistically inhibit breast cancer cell tumorigenesis in vitro and in vivo. Oncol Lett. 2021; 21(2): 99. doi: 10.3892/ol.2020.12360.Fan J., Jiang H., Cheng L., Ma B., Liu R. Oncolytic herpes simplex virus and temozolomide synergistically inhibit breast cancer cell tumorigenesis in vitro and in vivo. Oncol Lett. 2021; 21(2): 99. doi: 10.3892/ol.2020.12360.D’arrigo P., Dubois M., Sanchez Gil J., Lassence C., Hego A., Brouwers B., Lombard A., Rogister B., Neirinckx V., Lebrun M., SadzotDelvaux C. An oncolytic herpesvirus expressing a CXCR4 antagonist interferes with glioblastoma cells’ stemness features and migration. Mol Ther Oncol. 2025; 33(4): 201083. doi: 10.1016/j.omton.2025.201083.D’arrigo P., Dubois M., Sanchez Gil J., Lassence C., Hego A., Brouwers B., Lombard A., Rogister B., Neirinckx V., Lebrun M., SadzotDelvaux C. An oncolytic herpesvirus expressing a CXCR4 antagonist interferes with glioblastoma cells’ stemness features and migration. Mol Ther Oncol. 2025; 33(4): 201083. doi: 10.1016/j.omton.2025.201083.Kim S., Jung B.K., Kim J., Jeon J.H., Kim M., Jang S.H., Kim C.S., Jang H. Anticancer effect of the oncolytic Newcastle disease virus harboring the PTEN gene on glioblastoma. Oncol Lett. 2024; 29(1): 6. doi: 10.3892/ol.2024.14752.Kim S., Jung B.K., Kim J., Jeon J.H., Kim M., Jang S.H., Kim C.S., Jang H. Anticancer effect of the oncolytic Newcastle disease virus harboring the PTEN gene on glioblastoma. Oncol Lett. 2024; 29(1): 6. doi: 10.3892/ol.2024.14752.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.