Рак молочной железы является самой распространенной злокачественной опухолью среди женщин как в  развитых, так и в развивающихся странах. Этиология рака молочной железы всё еще остается не до конца  изученной. Химические вещества, такие как фосфорорганическое соединение – малатион (карбофос),  используемый для борьбы с вредителями растений, являются этиологическими факторами для рака  молочной железы. Связь между инициацией рака молочной железы и длительным воздействием эстрогена  позволяет предпологать, что этот гормон может также играть этиологическую роль в этом процессе. Тем не  менее ключевые факторы, лежащие в основе формирования рака молочной железы, еще предстоит  установить. Влияние таких субстанций, как малатион и эстроген, анализировалось в экспериментальной  модели молочной железы у крыс. Различные цитоплазматические белки играют ключевую роль в  превращении нормальной клетки в злокачественную, и среди них есть семейство Ras-super и Ras- гомологичный A (Rho-A). Уровень этих белков был выше у животных, получавших малатион, чем у животных, получавших эстроген. E-кадгерины составляют большое семейство мембранных белков. 

Результаты исследования показали, что экспрессия E-кадгерина и виментина была выше, чем экспрессия белков c-Ha-ras и Rho-A у крыс, получавших эстрогены. При раке молочной железы  иммуногистохимический анализ является важным компонентом рутинных патологических исследований и  играет существенную роль в диагностической и прогностической оценке тяжести заболевания.

Целью настоящего исследования было выявление прогностических маркеров для пациентов с раком молочной железы.

Дендритные клетки (ДК) – это специализированная группа антиген-презентирующих клеток с высокой функциональной пластичностью, которые проявляют иммуностимулирующий или иммуносупрессивный потенциал в зависимости от последовательности и комбинации стимулов  микроокружения, определяющих их дифференцировку, созревание, активацию. Разработка  противоопухолевых ДК-вакцин основана на способности ДК специфически активированных in vitro  мигрировать для презентации антигенов Т-лимфоцитам in vivo. В работе проведено изучение элементов  опухолевого микроокружения, способных оказывать влияние на миграцию ДК. Изучение подвижности ДК в  экспериментальной аналитической системе Cell-IQ показало наличие обратной корреляции высокой силы  между средней скоростью прохождения траектории ДК и содержанием иммуносупрессивных факторов (ИСФ)  в супернатантах культивируемых клеток меланомы кожи (TGFβ1, IL-10, IL-18, VEGF-A, EGF, FGF, HGF, sFASL  (p<0,01)). Была выявлена обратная зависимость высокой силы угла движения популяции ДК от экспрессии  раково-тестикулярных антигенов (РТА) и других опухолеассоциированных антигенов (ОАА) на опухолевых  клетках: Melan A, тирозиназы, семейств MAGE, BAGE, NY-ESO-1 (p<0,05). Скорость движения ДК в системе ко- культивирования с клетками меланомы №894 составила 30,10±2,23 мкм/ч и отличалась от таковой в  присутствии 1 нг/мл IL-10 (10,45±0,52 мкм/ч), 10 нг/мл TGFβ1 (14,32±0,42 мкм/ч), 50 нг/мл VEGF (18,7±1,89  мкм/ч) (p<0,05). Можно предполагать, что содержание этих ИСФ в периферической крови больных является  одним из факторов, определяющих клиническую эффективность противоопухолевой ДК-иммунотерапии.

С помощью DIC-микроскопии и конфокальной микроскопии были проанализированы изменения морфологии,  миграционных характеристик и межклеточных адгезионных контактов в культуре клеток рака молочной железы MCF-7-SNAI1 при активации экспрессии транскрипционного фактора ЭМП – SNAI1. Как показал Вестерн-блот  анализ, экспрессия SNAI1 достигала максимальных значений через 24 часа после переноса клеток в среду без  тетрациклина и поддерживалась на этом уровне в течение семи дней. В клетках в течение семи дней  сохранялась экспрессия Е-кадхерина, при этом тангенциальные межклеточные адгезионные контакты,  характерные для клеток со стабильной межклеточной адгезией, замещались радиальными контактами. В  радиальных контактах в течение 24–72 часов отмывки от тетрациклина продолжалась аккумуляция Е- кадхерина. В результате активации SNAI1 клетки вступали в ЭМП и приобретали миграционную активность. На  двумерном субстрате клетки мигрировали как индивидуально, так и коллективно. С увеличением  продолжительности отмывки от тетрациклина повышался процент клеток, мигрировавших через поры в  миграционных камерах, способность клеток инвазировать эпителиальный монослой, напротив, снижалась.  Полученные данные свидетельствуют о том, что сохранение гибридного эпителиально-мезенхимального  фенотипа и аккумуляция Е-кадхерина в межклеточных адгезионных контактах на ранних этапах ЭМП не  препятствуют разрушению стабильной межклеточной адгезии и приобретению клетками миграционной активности.

Специфическое блокирование амплификации аллеля дикого типа в ПЦР с помощью олигонуклеотидов, модифицированных по остатку рибозы (закрытые нуклеиновые кислоты, locked nucleic acids, LNA), используется для высокочувствительной детекции соматических мутаций в опухолях. Описаны различные версии метода анализа мутаций с использованием LNA-олигонуклеотидов как с дополнительной модификацией фосфотиоатными группами, так и без таких групп, при этом использовались  различные ДНК полимеразы. В работе проведен анализ оптимальных условий для успешного специфического блокирования ПЦР с помощью LNA-олигонуклеотидов при анализе мутаций в генах KRAS и  BRAF. Мы обнаружили, что фосфотиоатная защита на 5’-конце олигонуклеотидов не влияет на эффективность блокирования аллеля дикого типа. Выявлено, что для большинства последовательностей  эффективное блокирование наблюдается при проведении шага отжига и элонгации ПЦР при температуре на  20–25°С ниже температуры плавления LNA-олигонуклеотида. При таких условиях реакции возможна простая и высокочувствительная детекция мутаций в генах KRAS и BRAF с использованием как секвенирования по Сэнгеру, так и ПЦР в реальном времени с Taqman зондами.

Участие экзосом в патогенезе злокачественных опухолей основано на их способности проникать внутрь  клеток-реципиентов, вызывая в последних каскад генетических и эпигенетических изменений. Ранее мы  показали, что экзосомы, продуцируемые различными вариантами эстроген-независимых сублиний клеток  рака молочной железы (MCF-7/T, полученной в результате длительного культивирования клеток в  присутствии антиэстрогена тамоксифена, и MCF-7/M, полученной в результате культивирования клеток с  метформином), способны индуцировать резистентность в родительских клетках MCF-7. В настоящей работе  для исследования характерных особенностей состава экзосом резистентных клеток был проведен  сравнительный анализ протеома и профиля микроРНК контрольных экзосом и экзосом, полученных от  резистентных сублиний. В целом в образцах экзосом было идентифицировано более 400 белков, из которых  только 2 белка, DMBT1 (Deleted in Malignant Brain Tumors 1) и THBS1 (Thrombospondin-1), были  гиперэкспрессированы в обоих типах резистентных экзосом (менее 5 % от общего количества белков,  дифференциально экспрессированных в экзосомах резистетных клеток), что свидетельствует об уникальном  составе экзосомальных белков для каждого типа резистентных клеток. Сравнительный анализ  состава микроРНК, дифференциально экспрессированных в обоих вариантах экзосом резистентных клеток,  выявил 180 гиперэкспрессированных микроРНК и 202 микроРНК с пониженной экспрессией. Среди них 4  гиперэкспрессированных и 8 гипоэкспрессированных микроРНК оказались ассоциированы с развитием  гормональной резистентности клеток рака молочной железы. Биоинформатический анализ 4  гиперэкспрессированных микроРНК выявил 2 микроРНК, mir-101и mir-181b, участвующих в стимуляции PI3K  сигналинга, свидетельствуя о важной роли последнего в развитии гормональной резистентности  клеток рака молочной железы. 

На сегодняшний день влияние процессов аутофагии на канцерогенез остается не до конца изученным. С  одной стороны, аутофагия является опухолевым супрессором за счет активации разрушения онкогенных  протеинов, токсичных белков и дефектных органелл, которые могут обладать агрессивными свойствами и  способствовать повреждению ДНК клетки. C другой стороны, аутофагия может способствовать выживанию  опухолевых клеток в условиях гипоксии и присутствия активных форм кислорода, что происходит  преимущественно за счет блокировки механизмов апоптоза, увеличивая шансы на поддержание циркуляции  опухолевого клона. Регуляция аутофагии является сложным, многоэтапным и комплексным  процессом. Основным его регулятором является сигнальный путь, который активирует белок  протеинкиназосерин-треониновой специфичности m-Tor (мишень рапамицина у млекопитающих). В  литературе имеются данные о влиянии белков аутофагии ATG5, LC3A и LC3B, Beclin-1 на способность  злокачественно трансформированных клеток к выживанию, а также на развитие опухоли и ее прогрессирование. Крайне актуальными являются исследования, направленные на поиск возможных взаимосвязей между процессами аутофагии и патогенетическими механизмами канцерогенеза.

Цель исследования – изучить взаимосвязь экспрессионных параметров белков-регуляторов аутофагии m-TOR и Beclin-1 с параметрами лимфогенного метастазирования при колоректальном раке.

Материал и методы. В исследование были включены 105 пациентов с колоректальным раком T1–4N0–3M0,
находившихся на лечении в отделении торако-абдоминальной онкологии НИИ онкологии Томского НИМЦ в  период с 2012 по 2015 г. Средний возраст больных составил 59,7±4,3 года. Морфологическая верификация  диагноза колоректального рака проводилась на биопсийном материале фрагментов ткани первичной  опухоли. Распространенность онкологического заболевания определялась согласно международной классификации по системе TNM (2002).

Результаты. Анализ частоты лимфогенного метастазирования в зависимости от наличия или отсутствия  экспрессии белков m-Tor и Beclin-1 в цитоплазме опухолевых клеток выявил статистически значимую связь между этими параметрами.

Заключение. Полученные данные отчетливо демонстрируют тот факт, что снижение или утрата активности  процессов аутофагии в опухоли сопровождается реализацией механизмов лимфогенной диссеминации, которая является предиктором неблагоприятного прогноза заболевания.

Для пациентов с выявленной наследственной мутацией E-cadherin-1 (CDH1) терапией выбора является  профилактическая гастрэктомия для устранения риска развития рака диффузного типа. Представленный  клинический пример описывает редкий случай наследственного рака желудка диффузного типа (HDGC),  ассоциированного с мутацией в гене CDH1, впервые описанного в России. В 2013 году 28-летняя пациентка  была поставлена на учет в клинической онкогенетической лаборатории с семейной историей рака желудка.  Молекулярно-генетический анализ выявил наследственную мутацию в гене CDH1. Риск заболеть раком в  течение жизни у пациентов с выявленной мутацией превышает 80 %. Гистологическое исследование  биопсийного образца, полученного при эндоскопии, обнаружило изолированные мелко-круглые клетки в lamina  propria. В отделе абдоминальной онкологии пациентке было проведено хирургическое вмешательство:  лимфодиссекция в объеме D2 с сохранением селезенки и тотальная гастрэктомия с Roux-en-Y реконструкцией с  формированием тощекишечного резервуара.

Цель исследования – оценить частоту встречаемости патогенных мутаций в BRCA1 гене у женщин с раком молочной железы, проживающих в России.

Материал и методы. Проведён анализ полной кодирующей части гена BRCA1 у 445 больных раком молочной  железы на ранней стадии (возраст больных до 40 лет), проживающих в Новосибирской области (Россия), с  помощью метода таргетного секвенирования на платформе Ion Torrent. Результаты. Выявлено 40 (9 %)  носительниц различных патогенных мутаций. У 35 (7,9 %) пациенток обнаружена мутация 5382insC, описанная  ранее как «мутация-основателя» в славянской популяции. У 5 (1,1 %) пациенток были выявлены  другие различные патогенные мутации, а именно C61G, 462delCC, E143X, 4153delA и IVS18 + 1G> T. Кроме  того, 29 генетических вариантов с отсутствующей или неясной клинической значимостью были обнаружены в  гене BRCA1 у 445 больных раком молочной железы на ранней стадии. Выводы. Получены данные о частоте  генетических вариаций гена BRCA1 у больных раком молочной железы на ранней стадии, проживающих в  Новосибирской области (Россия). Доля мутации 5382insC составляет 87,5 % от всех патогенных мутаций в гене BRCA1, обнаруженных у пациенток.

Введение. Внутриопухолевая гетерогенность представляет собой характерную черту большинства злокачественных новообразований, в том числе и меланомы кожи. Данное свойство является  одним из препятствий для проведения эффективной таргетной терапии, поскольку у различных субклонов опухолевых клеток наблюдается вариабельная чувствительность к данным препаратам. С  современных позиций терапия злокачественных новообразований требует персонифицированного подхода  для каждого конкретного пациента.

Цель исследования – оценка возможных различий между тканями меланомы, выделенными из различных участков первичной опухоли одного пациента на транскриптомном уровне.

Материал и методы. В работе были использованы культуры клеток меланомы, полученные из центральной и периферической частей первичной опухоли двух пациентов. Исследование транскриптомов клеток  проводили методом микрочипирования с последующим биоинформатическим анализом.

Результаты. В клетках меланомы первого пациента, полученных из центрального и периферического  участков одной опухоли, не было выявлено различий по транскриптомному профилю. У второго пациента  имели место существенные различия (по 2953 транскриптам из 48226). В клетках, полученных из  центрального участка опухоли, выявлено повышение мРНК генов, кодирующих белки, ассоциированные с  иммунным ответом опухоли, транспортные белки ABC‑семейства, сигнальные молекулы класса цитокинов. В  культуре клеток, выделенной из периферического участка этой же опухоли, зарегистрировано увеличение  уровня мРНК генов, кодирующих белки внеклеточного матрикса и воспалительного ответа. В целом  различия между субклонами клеток второго пациента касались ряда сигнальных каскадов, играющих  ведущую роль в онкогенезе (MAPK, PI3K-Akt-mTOR, VEGFAVEGFR2 и др). Заключение. Проведенное  исследование позволяет оценить возможные различия между клетками внутри опухоли на  транскрипционном уровне с целью поиска новых подходов для персонифицированной терапии.

Введение. Эффективность противоракового лечения зависит от биологических факторов опухоли.

Цель исследования – определить активность протеасом и кальпаинов и выявить их связь с содержанием  VEGF, HIF-1α и NF-κΒ в опухолевых, неизмененных и метастатических тканях карциномы почек (RCC).

Материал и методы. В исследование были включены 93 пациента с почечно-клеточным раком. Содержание  транскрипционных факторов и VEGF определяли методом ИФА. Количественный состав протеасом исследовали  методом Вестерн-блоттинг. Активность протеасомы и кальпаина определяли с использованием специфического флюорогенного субстрата.

Результаты. Выявлена инактивация протеолиза у пациентов с раком почки. Прогрессирование заболевания  было связано со значительным снижением уровня клеточного протеолиза и ростом содержания  транскрипционных и ростовых факторов в тканях первичной опухоли. Активация протеолиза была обнаружена в метастатических тканях.

Выводы. В результате проведенного исследования показано, что факторы транскрипции NF-κΒ, HIF-1α, VEGF и внутриклеточные протеолитические системы участвуют в прогрессировании рака почки.

Целью исследования явилось определение экспрессии CXCR4 в различных популяциях циркулирующих (ЦОК) и одиночных (дискретных) опухолевых клеток рака молочной железы.

Материал и методы. В исследование были включены 35 пациенток с инвазивной карциномой неспецифического типа молочной железы (T1–4N0–2M0) в возрасте от 29 до 69 лет. Экспрессию CXCR4 в  различных популяциях ЦОК оценивали методом проточной цитометрии. Для оценки экспрессии CXCR4 в  аналогичных популяциях одиночных (дискретных) опухолевых клеток в первичной опухоли использовали 
метод конфокальной микроскопии.

Результаты. Нами было установлено, что CXCR4 экспрессировался ЦОК без признаков стволовости и  эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП), ЦОК с признаками ЭМП, но без маркеров стволовости, а  также ЦОК с признаками стволовости, но без признаков ЭМП. У всех пациенток в крови ЦОК с признаками  стволовости и ЭМП не экспрессировался CXCR4. В первичной опухоли молочной железы CXCR4  обнаруживался как на одиночных (дискретных) опухолевых клетках без признаков стволовости с  признаками ЭМП, так и на клетках с маркерами стволовости и ЭМП. У всех пациенток в образцах первичной  опухоли отсутствовали стволовые и нестволовые клетки без признаков ЭМП.

Заключение. Таким образом, CXCR4 экспрессируются на различных популяциях ЦОК. Экспрессия CXCR4  не зависит от наличия или отсутствия признаков стволовости и/или ЭМП в опухолевых клетках. Также мы  показали, что некоторые популяции одиночных (дискретных) опухолевых клеток в первичной опухоли  характеризуются способностью презентировать на своей мембране CXCR4 и могут являться источником соответствующих популяций ЦОК.

Целью исследования явилась оценка возможности применения однофотонной эмиссионной компьютерной  томографии (ОФЭКТ) с инновационным отечественным радиофармпрепаратом (РФП) 99mТс-1-тио-D-глюкоза (99mТс-ТГ) в диагностике и стадировании злокачественных лимфом.

Материал и методы. В исследование включены 15 пациентов (средний возраст 50,7±18,3 года) с впервые
диагностированными злокачественными лимфомами. Сцинтиграфическое исследование проводили на гамма- камере E.CAM 180 фирмы “Siemens” (Германия) через 4 часа после введения РФП в дозе 500 МБк.

Результаты. По данным ОФЭКТ, патологическое включение 99mТс-ТГ в лимфатические узлы наблюдалось  у 14 (93 %) из 15 пациентов. У одной пациентки не удалось визуализировать определяемый с помощью  компьютерной томографии (КТ) единичный, увеличенный поднижнечелюстной лимфатический узел. Этот  ложноотрицательный результат исследования связан с физиологичным усилением аккумуляции 99mТс-ТГ в  орофарингеальной области. Сложности, связанные с высокой фоновой активностью крови, отмечались при  визуализации паратрахеальных, парааортальных и паракардиальных лимфатических узлов. Наиболее часто  патологическое накопление РФП отмечалось в аксиллярных, над- и подключичных, а также шейных  лимфатических узлах. С помощью ОФЭКТ с 99mТс-ТГ экстралимфатические гиперметаболические участки  определялись у 7 (78 %) из 9 пациентов с ранее диагностированным экстранодальным поражением. Кроме  того, у одной пациентки по данным ОФЭКТ был выявлен гиперметаболический очаг в легком, не  обнаруженный по результатам КТ. В исследуемой выборке пациентов по данным КТ и ОФЭКТ с 99mТс-ТГ  наличие поражения костного мозга наблюдалось в одном случае. Кроме того, сцинтиграфическое  исследование позволило выявить гиперметаболические участки в лопатке у пациента с интактной по  результатам КТ костной тканью. 

Заключение. Результаты исследования позволяют рекомендовать  использование 99mТс-ТГ ОФЭКТ в качестве дополнительного диагностического метода для обследования  пациентов со злокачественными лимфомами для стадирования заболевания.

Введение. Рак толстой и прямой кишки – разные опухоли с клинической и биологической точек зрения. В  настоящее время рак толстой и прямой кишки синонимично называют колоректальным раком. Основываясь  на нашем опыте в фундаментальных и клинических исследованиях в этой области, мы пришли к выводу, что  термин «колоректальный рак» необходимо пересмотреть, его нельзя использовать как обобщающее понятие.

Материал и методы. Были проанализировали данные литературы и собственные результаты исследований, чтобы доказать или отклонить эту гипотезу.

Результаты. Выявлены следующие очевидные различия: риск развития рака прямой кишки в 4 раза выше,  чем рака толстой кишки; молекулярный канцерогенез при раке толстой кишки отличается от рака прямой  кишки; физическая активность помогает предотвратить рак толстой кишки, но не прямой кишки;  существуют патогистологические различия между раком прямой и толстой кишки. Кроме того, имеются  значительные клинические отличия между этими злокачественными новообразованиями, такие как  различная хирургическая топография и объемы операций, разные показания для назначения  комбинированного лечения, поскольку рак прямой кишки менее чувствителен к химиотерапии, чем рак  толстой кишки, и отличаются прогностические факторы эффективности мультимодальной терапии  (например, тимидилат синтетаза и дигидропиримидин дегидрогеназа).

Дискуссия. Рак толстой и прямой кишки определенно различаются по этиологии и формальному  канцерогенезу, эффективности первичной профилактики, связанной с физической активностью, обычной и  по параметрам молекулярной патологии. Согласно нашим данным, можно утверждать, что с доклинической  точки зрения рак толстой и прямой кишки являются двумя разными опухолями, поскольку обладают  различными репрезентативными биологическими характеристиками. Рак толстой и прямой кишки также  существенно различаются по многим клиническим признакам, что было указано в отдельной статье,  представленной нашей исследовательской группой. Заключение. Термин «колоректальный рак» не должен  использоваться в фундаментальных и клинических исследованиях, как определение единого заболевания.  Рак толстой кишки не одно и то же, что и рак прямой кишки. Злокачественные новообразования толстой  кишки могут быть разделены на рак правой и левой половины ободочной кишки.

В обзоре проанализированы данные о роли хитиназоподобных белков (CLP), принадлежащих к семейству  белков, содержащих Glyco_18 домен и не обладающих ферментативной активностью, при различных  злокачественных новообразованиях. У человека идентифицировано 3 таких белка: YKL-40 (CHI3L1), YKL-39  (CHI3L2) и стабилин-связывающий CLP (SI-CLP). Хитиназоподобные белки, продуцируемые различными типами  клеток, в том числе опухолевыми, проявляют активность как цитокины и ростовые факторы, а также  они вовлечены в процессы воспаления. Высокий уровень CLP определяется в циркулирующей крови при  воспалительных заболеваниях и разных локализациях злокачественных опухолей. Освещены данные о  ключевых функциях CLP в физиологических и патологических условиях. Проанализированы сведения о  вовлечении CLP в процессы инвазии, метастазирования, ангиогенеза, их связи с опухолевой прогрессией.  Представлены собственные результаты, подтверждающие перспективность разработки прогностических и  предсказательных маркеров на основе CLP при злокачественных новообразованиях.